Определение лизоцимной активности сыворотки крови
15.11.2014
Реактивы: суточная культура М. Lysodeikticus, 0,5%-ный раствор натрия хлорида.
Приборы: химические пробирки, пипетки на 1, 2, 10 мл, стеклянная палочка, ФЭК, термостат.
Ход определения.
Готовят взвесь суточной культуры М. Lysodeikticus следующим образом: смывают 0,5%-ным раствором хлорида натрия, после чего полученную суспензию стандартизируют до содержания в 1 мл 1 млрд. микробных тел. Стандартизация на ФЭК до 0,320 при длине волны 400.
К 2 мл сыворотки крови, разведенной 0,5%-ным раствором натрия хлорида (1:20, 1,9 мл раствора натрия хлорида и 0,1 мл сыворотки), прибавить 2 мл приготовленной взвеси суточной микробной культуры. Контроль 2 мл 0,5%-ного раствора натрия хлорида и 2 мл микробной взвеси. Содержимое кювет осторожно перемешать тонкой стеклянной палочкой и калориметрировать при зеленом светофильтре. Затем пробы помещают в термостат на 3 часа при 37°С. Через 3 часа калориметрируют. Лизис микробных клеток происходит и в контроле, но не превышает 10-15%.
Расчет % лизиса микробных тел проводят по формуле:
где: Л - % лизиса;
Д0 - оптическая плотность содержимого опытных кювет до инкубации;
Д1 - оптическая плотность содержимого опытных кювет после инкубации;
Дко - оптическая плотность содержимого контрольных кювет до инкубации;
Дк - оптическая плотность содержимого контрольных кювет после инкубации.
