Определение амилазы

15.11.2014

Реактивы:
1. 9,078 г однозамещенного фосфорнокислого калия и 4,5 г натрий хлорида растворить в литровой колбе дистиллированной водой до метки.
2. 11,876 г хорошо выветрившегося фосфорнокислого натрия (Nа2НРO4*2Н2O) в 1 литре дистиллированной воды.
3. Свежеприготовленный раствор крахмала и все реактивы для определения сахара.
Приборы: химические пробирки, стаканчики, капилляр на 0,06 мл, пипетки на 1, 2, 5,10 мл, водяная баня, воронки, фильтры, вата,
Реактивы для определения сахара:
1. 45%-ный раствор сернокислого цинка (10-кратное разведение дает 0,45%-ный раствор).
2. Раствор красной кровяной соли: 1,65 г перекристаллизованной при искусственном свете красной кровяной соли и 10,6 г прокаленного (безводного) углекислого натрия растворяют в мерной колбе до литра. Раствор стоек при хранении в темноте.
3. Хлорцинковый раствор: 10 г сернокислого цинка и 50 г хлорида натрия растворяют в дистиллированной воде и доводят до объема 160 мл.
4. Йодистый калий. 12,5 г йодистого калия растворяют в воде и доводят в 100-мл колбе до метки. Хранить в темноте. Для анализа смешивают 40 мл хлорцинкового раствора и 10 мл раствора йодистого калия
5. 3%-ная химически чистая уксусная кислота
6. 1%-ный раствор крахмала. К 5 мл дистиллированной воды вносят 1 г крахмала и доливают насыщенный раствор хлорида натрия до 100 мл.
7. n/200 раствор гипосульфита n/10 растворить в 95 мл дистиллированной воды.
8. 10 н. раствор гидроксида натрия.
9. Раствор йодноватокислого калия. 0,3566 г йодноватокислого калия растворить в 2-литровой колбе дистиллированной водой до метки. Раствор служит для проверки титра гипосульфита, который следует проводить каждую неделю. Для этого к 2 мл йодноватокислого калия добавить 2 мл уксусной кислоты и 2 мл смеси 3 и 4 растворов и 2 капли раствора крахмала. Жидкость перемешивается и титруется гипосульфитом до исчезновения синего оттенка.
Ход определения.
Капиллярной пипеткой берут 0,06 мл крови и смешивают с 3 мл дистиллированной воды. После полного гемолиза добавить 3 мл буферной смеси и перемешать. Затем пипеткой отмерить по 2 мл этой смеси в 2 пробирки, опытная и контрольная. В контроль добавляют 1 мл крахмала, смешать и добавить 0,45%-ный раствора сернокислого цинка и 1 мл раствора 10 н. гидроксида натрия. Жидкость на 5 минут помещают в водяную баню и затем определяют количество сахара (по Гагедорну и Иенсеку).
Содержимое каждой пробирки фильтруется в отдельный стаканчик, через ватку, смоченную подогретой дистиллированной водой. Затем каждую пробирку по 2 раза ополаскивают 3 мл дистиллированной воды, которая также фильтруется. Фильтрат должен быть абсолютно прозрачен. Затем в стаканчики вносят по 2 мл раствора красной кровяной соли и помещают на 15 минут в кипящую водяную баню. После охлаждения в стаканчики добавляют по 2 мл смеси 3 и 4 растворов, 2 мл уксусной кислоты и по 2 капли крахмала. Перемешивают, титруют раствором гипосульфита до исчезновения синего окрашивания.
При вычислении пользуются таблицей Гагедора (табл. 8), показывающей, какое количество глюкозы соответствует израсходованному количеству гипосульфита.
Пример:
При титровании опыта ушло 0,55 мл гипосульфита, этому количеству по таблице соответствует 260 мл сахара. Холостой пробе соответствует 1,72 мл гипосульфата, что по таблице соответствует 50 мг сахара. Разность в показателях таблицы между опытом и контролем (260 - 50 = 210) дает количество сахара в мг%. Помножив данный показатель на 50 (соответствует разведению крови), определяется количество амилазы.

Определение амилазы


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: