Определение каталазы (метод Баха)

15.11.2014

Реактивы: 10%-ный раствор серной кислоты, 10 н титрованый раствор перманганата калия, 1% перикись водорода (на 1 часть пергидроля Мерка : 29 частей дистиллированной воды).
Приборы: химические стаканчики на 50 мл, капилляр от гемометра Салли, пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, микробюретка.
Ход определения.
В стаканчик налить 20 мл дистиллированной воды, добавить кровь из капилляра Салли, смешать. Это основное разведение (1:100), им пользуются для определения фермента. Затем в 2 химических стакана налить по 7 мл дистиллированной воды и добавить 1 мл основного разведения крови. Для разрушения фермента содержимое 2 контрольного стаканчика нагревают в течение 2 минут Затем после охлаждения в каждый из них добавляют по 2 мл раствора перекиси водорода и переносят в термостат на 30 мин. при температуре +37°С. Для прекращения действия фермента в каждый стаканчик приливают по 5-10 мл серной кислоты и титруют их содержимое раствором перманганата калия до появления стойкого, не исчезающего при перемешивании розового окрашивания.
На контрольную пробу, в которой каталаза разрушена кипячением, израсходуется на несколько мл больше титрованного раствора, чем на первую, где наоборот, часть перекиси разложена ферментом.
Каталазное число определяется по формуле:

КЧ = (Тк - То)х 1,7,

где: КЧ - каталазное число;
Тк - титр контрольной пробы;
То - титр опытной пробы.
Каталазный коэффициент определяется по формуле:
Х = КЧ/Л,

где: X - каталазный коэффициент;
КЧ - каталазное число;
Л - количество эритроцитов.


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: