Количественное определение общего белка и альбумина в сыворотке крови

15.11.2014

Реактивы: 0,85%-ный раствор хлористого натрия, 0,2 н. гидроксид натрия, биуретовый реактив, кристаллический сывороточный альбумин.
Приборы: химические пробирки, пипетки на 1 и 10 мл, термостат, ФЭК.
Приготовление реактивов:
1. 0,2 н. гидроксид натрия: 8 г гидроксида натрия вносят в колбу на 1 л и приливают дистиллированную воду до метки.
2. Биуретовый реактив: 9 г натрия виннокислого растворяют приблизительно в 400 мл 0,2 н. раствора гидроксида натрия; добавляют 3 г кристаллической сернокислой меди и перемешивают до полного растворения, только после этого в смеси растворяют 5 г йодистого калия и доводят раствор до 1 л 0,2 н. раствором гидроксида натрия (раствор неограниченно стоек).
Ход определения.
0,1 мл исследуемой сыворотки вносят в химическую пробирку, содержащую 2,4 мл 0,85% раствора хлористого натрия. Прибавляют 2,5 мл биуретового реактива и далее инкубируют при 37°С 30 минут, затем измеряется оптическая плотность при зеленом светофильтре. Расчет ведется по калибровочной кривой.
Стандартизация. Для построения калибровочной кривой наиболее удобно пользоваться кристаллическим сывороточным альбумином (лошадиным или бычьим). Готовят 400 мг% раствор альбумина в 0,85%-ном растворе хлористого натрия (табл.2).

Количественное определение общего белка и альбумина в сыворотке крови

Затем прибавляют по 2,5 мл биуретового реактива, и заканчивают определение, как записано выше. При отсутствии кристаллического альбумина для стандарта можно использовать сыворотку крови, в которой общее содержание белка определено по Кьельдалю. Эту сыворотку разводят 0,85%-ным раствором хлористого натрия до концентрации 400 мг% белка и дальнейшее построение колибровочной кривой производят точно так же, как и при работе с кристаллическим альбумином.


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: