Модельные системы по изучению в культуре in vivo активности факторов биологической, физической или химической природы

25.10.2015

Модельная система по изучению тимического и Т-лимфоцитарного контроля процессов миграции и дифференцировки стволовых кроветворных клеток
Разработанные модельные системы позволяют изучать действие различных факторов на процессы миграции стволовых кроветворных клеток в различных условиях опыта, на их дифференцировку в направлении эритро- и миелопоэза, на регуляторную роль сингенных Т-лимфоцитов, нормализующих процессы миграции и дифференцировки стволовых клеток, нарушенных удалением тимуса.

Модельные системы по изучению в культуре in vivo активности факторов биологической, физической или химической природы

Модельные системы по изучению в культуре клеток in vivo действия различных факторов на процессы миграции T- и В-лимфоцитов
Анализ действия факторов биологической, физической или химической природы на миграцию В-лимфоцитов (1)
Мышам во время летального облучения экранируют свинцовым экраном участок костного мозга, через 2 дня после облучения вводят строго фиксированную дозу клеток тимуса (обычно 20 млн/мышь) и антиген (эритроциты барана). На 10 сутки после облучения извлекают селезенки и определяют количество антителообразующих клеток методом N.K. Jerne, RE Nordin (см. рис. 18.3), образуемых В-лимфоцитами, мигрировавшими их костного мозга в селезенку и взаимодействующими с введенными Т-лимфоцитами тимуса или лимфатических узлов.
Модельные системы по изучению в культуре in vivo активности факторов биологической, физической или химической природы

Анализ действия факторов биологической, физической или химической природы на миграцию Т-лимфоцитов (2)
Мышам во время летального облучения экранируют свинцовым экраном область тимуса, через 2 дня после облучения вводят строго фиксированную дозу клеток костного мозга (обычно 10 млн/мышь) и антиген (эритроциты барана). На 10 сутки после облучения извлекают селезенки и определяют количество антителообразующих клеток методом Jerne N.K., Nordin RF., образуемых введенными В-лимфоцитами, взаимодействующими с Т-лимфоцитами, мигрировавшими из тимуса в селезенку.
Во всех случаях изучаемыми факторами воздействуют на мигрирующие клетки непосредственно после облучения животных. При воздействии фактором в диапазоне доз возможны как в одном, так и в другом вариантах опыта 3 основных типа результатов: применяемое воздействие не влияет на миграцию лимфоцитов, поэтому в опытной группе число AOK не отличается от числа AOK в контроле (облученные мыши без воздействия фактором); применяемое воздействие оказывает ингибирующее действие на миграцию лимфоцитов — в опытной группе по сравнению с контрольной снижено число АОК; применяемое воздействие оказывает стимулирующее действие на миграцию лимфоцитов — в опытной группе по сравнению с контрольной число AOK повышено.
Модельная система для одновременного определения митостатического и лимфотоксического действия циторстатиков и иммунодепрессантов(См. рис. 18.15.)
Модельная система по изучению стимулирующего действия макрофагов на хелперную активность Т-лимфоцитов и регуляции их взаимодействия иммуномодуляторами
Принципиальная схема модельной системы показана на рис. 18.16. Система основывается на наблюдениях, показывающих, что взаимодействие интактных макрофагов с клетками тимуса сопровождается секрецией макрофагами растворимых факторов, активирующих пролиферацию и дифференцировку тимических клеток и усиливающих их хелперную активность. Эти эффекты регистрируются в следующей системе.
В чашки Петри помещают клетки перитонеального экссудата мышей, через сутки на образовавшийся монослой наносят сингенные клетки тимуса в соотношении макрофаг-тимоцит 1:60 и клеточную смесь инкубируют при 37°С в течение 1 часа. Затем тимоциты смывают с монослоя макрофагов, отмывают их средой 199, осаждают центрифугированием при 250g в течение 10 мин., осадок (тимические клетки) ресуспендируют в среде 199 и клетки вводят внутривенно в смеси с сингенными клетками костного мозга и эритроцитами барана сингенным мышам через 4-24 часа после их облучения в летальной дозе. Через 8 сут. реципиентов убивают, извлекают селезенки и считают число продуцентов антител в сравнении с контрольной группой животных. Этой группе мышей вводят тимоциты, не инкубированные с макрофагами.
При изучении действия иммуномодуляторов на процессы взаимодействия макрофаг-тимоцит препараты в диапазоне доз вносят в чашки Петри в момент наслоения тимоцитов на монослой макрофагов и клетки с препаратом инкубируют 1 час при 37°С. Последующие этапы эксперимента ничем не отличаются от вышеописанных.
Модельные системы по изучению в культуре in vivo активности факторов биологической, физической или химической природы
Модельные системы по изучению в культуре in vivo активности факторов биологической, физической или химической природы

В оригинальном (авторском) описании системы использовали три иммуномодулятора — полиакриловую кислоту (ПАК), поливинилпирролидон (ПВД) и сополимер акриловой кислоты с N-винилпирролидоном (NA-5).
Характер действия вышеуказанных трех иммуномодуляторов на активируемую макрофагами хелперную активность тимических клеток показан в табл. 18.3.
Модельные системы по изучению в культуре in vivo активности факторов биологической, физической или химической природы