Определение остаточного азота

15.11.2014

Реактивы: 10%-ный раствор вольфрамовокислого натрия, сернокислый натрий, 1 н. раствор серной кислоты, сернокислый кадмий, борная кислота, гидроксид натрия, фтористый натрий, дистиллированная вода, 27%-ный гидроксид натрия, 5%-ный раствор йодистого калия, 1 н. раствор соляной кислоты, сернокислый аммоний, бромистый калий, бром.
Приборы: ФЭК-Н-57 или ФЭК-56, центрифуга, центрифужные и химические пробирки, микропипетки на 0,1 мл, пипетки мерные на 1 мл.
Приготовление реактивов:
1. Осадитель белков. В мерную колбу на 1 л помещают 44,8 мл 10%-ного раствора вольфрамовокислого натрия и 6,4 г сернокислого натрия, растворяют приблизительно в 800 мл дистиллированной воды, прибавляют 44,8 мл 1-нормального раствора серной кислоты и 2 г сернокислого кадмия, после чего объем доводят до 1000 мл дистиллированной водой.
2. Дезаминирующий гипобромидный раствор.
Раствор А1 - 84,5 г борной кислоты и 15,6 г гидроксида натрия растворяют в 500 мл воды, кипятят в течение 30 минут и после охлаждения доливают водой до 1 000 мл.
Раствор А2 - 5 г фтористого натрия растворяют в 100 мл горячей воды и горячим фильтруют через бумажный фильтр.
Раствор А3 - 27%-ный раствор гидроксида натрия.
Раствор А - смешивают 250 мл раствора А1 с 150 мл раствора А2 и 50 мл раствора А3.
Раствор Б - в колбе емкостью 1000 мл растворяют 20 г бромистого калия приблизительно в 500 мл воды, прибавляют 8 г (2,5 мл) брома, взбалтывают до растворения и доливают водой до 1000 мл
Для получения гипобромидного раствора непосредственно перед опытом смешивают 9 частей раствора А и 1 часть раствора Б.
3. 5%-ный раствор йодистого калия. Готовят перед работой из 10%-ного раствора, который в темной посуде хранят в холодильнике,
4. 1-нормальный раствор соляной кислоты. 82 мл концентрированной соляной кислоты уд. веса 1,19 доводят водой до 1000 мл.
5. Основной стандартный раствор азота (40 мкг/мл). 47,2 мг перекристаллизованного и высушенного до постоянной массы сернокислого аммония растворяют в 50 мл дистиллированной воды и доводят водой до 250 мл в мерной колбе. Для приготовления рабочего стандартного раствора азота (8 мкг/мл) основной раствор разводят в 5 раз.
Ход определения.
В 2 центрифужные пробирки (параллельные пробы) вносят по 1 мл воды, по 0,02 мл сыворотки, плазмы или цельной крови и 1 мл осадителя белков (реактив 1), смешивают и через 5 минут центрифугируют. Далее определение ведется согласно табл. 4.

Определение остаточного азота

Все смешивают и выдерживают в темном месте в течение 10 минут. Колориметрируют на ФЭК-Н-57, синий светофильтр, длина волны 413 ммк или ФЭК-56, синий светофильтр, длина волны 400 ммк, в кювете шириной 5 мм. Компенсационная жидкость - вода.
Расчет основан на том, что на 1 атом азота расходуется 3 атома брома или йода. Таким образом, 1 мл 0,01 н. раствора гипобромида эквивалентен 0,046 мг азота. Поэтому при содержании азота в сыворотке крови более 200 мг% надо брать меньшее количество центрифугата, внося соответствующие коррективы в расчет.
Расчет ведется по формуле:
X = (Э контроль - Э опыта) / (Э контроля -Э стандарта) х 40;

где Э - экстинкция.


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: