Определение фосфора в сыворотке крови колориметрическим методом по Биргсу
15.11.2014
Реактивы: фосфорный калий, дистиллированная вода, хлороформ, безводный углекислый натрий, сернокислый натрий, гидрохинон, серная кислота, ТХУ, молибденовокислый аммоний, серная кислота.
Приборы: ФЭК, химические пробирки, воронки, обеззоленные фильтры, пипетки на 5 мл.
Приготовление реактивов.
1. Стандартный раствор Р: 4,394 г фосфорного калия (КН2РО4) разводится до метки 1 литр дистиллированной водой. Из раствора берут 1 часть и смешивают с 49 частями дистиллированной воды. К обоим растворам добавляют несколько капель хлороформа. Второй раствор - стандартный.
2. Раствор карбонат сульфита: 40 г безводного углекислого натрия разводится дистиллированной водой до 200 мл, затем 7,5 г сернокислого натрия разводится дистиллированной водой до 50 мл. Оба раствора смешивают и фильтруют.
3. Раствор гидрохинона (1 г гидрохинона и 99 мл дистиллированной воды). К 100 мл раствора добавить 1 каплю серной кислоты.
4. 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
5. Раствор молибденовокислого аммония: молибденовокислый аммоний 25 г разводится дистиллированной водой до 300 мл; концентрированная серная кислота 75 мл разводится дистиллированной водой до 125 мл. Оба раствора смешивают.
Ход определения.
Осаждение белков. В пробирку вносим 0,5 мл сыворотки крови, 1,5 мл дистиллированной воды и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты. Взбалтывают и оставляют на несколько минут. Затем жидкость фильтруют через обеззоленный фильтр.
Все размешивается и через 10 минут калориметрируется на ФЭК при длине волны 440.
Расчет ведется по формуле:
X = Н2 x 0,02 / Н1;
где: X - количество фосфора в 0,5 мл сыворотки, в 100 мл его в 200 раз больше;
Н2 - оптическая плотность стандартного раствора;
Н1 - оптическая плотность исследуемого раствора.
