Определение кальция (по де-Ваарду)
15.11.2014
Реактивы: насыщенный раствор щавелекислого аммония (4%-ный раствор), 2%-ный раствор аммиака, 1 н. раствор серной кислоты, дистиллированная вода, 0,01 н. раствор перманганата калия. Раствор готовят за 15 дней до анализа.
Приборы: центрифуга, водяная баня, центрифужные пробирки, пипетки мерные на 2 и 10 мл, стеклянные палочки, микробюретка.
Ход определения.
В две центрифужные пробирки наливают по 1 мл дистиллированной воды, в третью контрольную (слепой опыт) 2 мл. В первые две пробирки переносят пипеткой по 1 мл сыворотки крови. Перемешивают, постукивая пальцем по нижнему концу пробирки. Затем во все пробирки добавляют по 0,5 мл раствора щавелекислого аммония, тщательно перемешивают и оставляют стоять в течение 30 минут. После чего центрифугируют содержимое пробирок в течение 10-15 минут при 2500-3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно, не взмучивая осадка, сливают, затем края пробирки вытирают фильтровальной бумагой до полного удаления жидкости. Щавеливокислый кальций остается на дне пробирок в виде белого осадка. К осадку добавляют 4 мл 2%-ного раствора аммиака (вместо аммиака можно добавлять дистиллированную воду), встряхивают пробирки и еще раз центрифугируют 10-15 минут. Вынув из цетрифуги пробирки, из них сливают надосадочную жидкость, повторяя остальные операции в том же порядке. Промывание осадка аммиаком повторяют еще раз. После центрифугирования последняя порция надосадочной жидкости тщательно сливается. К осадку щавеливокислого кальция добавляют 1 мл 1 н. раствора серной кислоты, содержимое размешивают стеклянной палочкой и, не вынимая палочки погружают пробирки на 2-3 минуты в горячую водяную баню. Затем горячий раствор титруют 0,01 н. раствором перманганата калия при постоянном помешивании до появления бледно-розового окрашивания, не исчезающего в течение минуты.
Расчет ведется по формуле:
Х = 0,2 (а-в) 100,
где: X - содержание кальция (мг%);
0,2 - количество (мг) кальция, соответствующее 1 мл 0,01 н раствора перманганата калия;
а - количество перманганата (мл), израсходованное на титрование испытуемого раствора;
в - количество перманганата калия (мл), израсходованное на титрование контроля;
100 - пересчет в мг%.
