Нефелометрический метод определения альбуминов и глобулиновых фракций

15.11.2014

Реактивы: гидроксид натрия, однозамещенный фосфорнокислый калий, хлороформ, дистиллированная вода.
Приборы: ФЭК химические пробирки, резиновые пробки, пипетки на 10, 5, 1 мл, мерные колбы на 100 и 500 мл.
Приготовление реактивов:
1. Основной фосфатный раствор: 33,5 г гидроксида натрия разводят в 400 мл дистиллированной воды и добавляют 226,8 г однозамещенного фосфорнокислого калия. Раствор охлаждают и доводят до 500 мл.
2. Рабочие фосфатные растворы: из основного раствора берут в мерные колбы на 100 мл: 92,4 мл (1), 74,9 мл (2), 58,8 мл (3), 48,7 мл (4) и доводят дистиллированной водой до метки. 100 мл. Для длительного хранения в растворы добавляют по капле хлороформа.
Ход определения.
Для каждой пробы устанавливается 5 пробирок. В пробирки 1, 2, 3, 4 вносим по 2 мл соответствующего фосфатного раствора. В 5 пробирку вносим 0,2 мл сыворотки крови, 0,3 мл дистиллированной воды и 1,5 мл основного фосфатного раствора, закрываем пробкой и перемешиваем. Из пробирки 5 по 0,2 мл смеси вносим в пробирки 1,2,3,4, тщательно, но осторожно перемешиваем. Через 15 минут определяем оптическую плотность на красном светофильтре в кювете шириной 1 см. Измерение оптической плотности пробирок идет в обратной последовательности.
Расчет белковых фракций ведется по формулам:
α = Е2 - Е3 / Е ;
β = Е3-Е4 / Е1;
γ = Е4 / Е1:
альбумины = 100% - (α + β + γ),
где: Е1, Е2, Е3, Е4 - оптическая плотность 1, 2, 3, 4 пробирок соответственно.


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: