Определение гемоглобина с применением стандартного водного раствора гемиглобинцианида

15.11.2014

Реактивы: Для приготовления трансформирующего раствора:
Реактив а: ацетонциангидрин марки Ч 0,5 мл.
Реактив б: калий железосинеродистый марки ХЧ 0,2 г; натрий двууглекислый марки ХЧ 1 г;
СО гемиглобинцианид.
Приборы: ФЭК, пипетки на 5 мл, капилляр гемометра Салли, колба на 1000 мл, пробирки.
Приготовление трансформирующего раствора: реактивы а и б переносят в мерную колбу, объем доводят дистиллированной водой до 1 литра. Трансформирующий раствор стабилен при хранении в посуде из светозащитного стекла при комнатной температуре. При появлении осадка или обесцвечивании раствор не пригоден к употреблению.
Ход определения.
В пробирку к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 0,02 мл крови (разбавление в 251 раз). Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10-20 минут. Затем проводят измерение оптической плотности раствора при длине волны 520-560 нм., толщина слоя 10 мм. Раствор сравнения - трансформирующий раствор. Расчет массовой концентрации гемоглобина в крови производят по градуировочному графику, построенному по стандартному образцу гемиглобинцианида, либо по формуле, приведенной в методике.
Построение градировочного графика.
Для построения градировочного графика раствор СО предварительно термостатируют при температуре 20°С в течение 30 минут, после чего готовят ряд разведений в соответствии с табл.1.

Определение гемоглобина с применением стандартного водного раствора гемиглобинцианида

Измеряется оптическая плотность растворов и строится градуировочный график в координатах: - «массовая концентрация гемоглобина», «оптическая плотность раствора СО гемоглобин-цианида», или по формуле:
Нв = (Еоп / Eco) х Ссо х К,

где: Нв - массовая концентрация гемоглобина в пробе крови, г/л;
Еоп - оптическая плотность опытной пробы;
Eco - оптическая плотность раствора СО гемиглобинцианида;
Ссо - массовая концентрация гемоглобинцианида в ГСО, г/л;
К - коэффициент разведения крови.


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: