Аспирация трахеи: показания, техника и интерпретация

14.12.2014

Изучение нарушений со стороны дыхательной системы у лошадей эволюционировало за последние годы: разработан ряд новых методик и модифицированы уже существующие методики. Современные методы обеспечивают большую точность при исследовании нижних отделов дыхательных путей, но остается некоторая путаница в отношении показаний для различных методик и интерпретации полученных результатов.
Аспираты из трахеи широко используются в ветеринарной медицине лошадей для обследования особей с подозрением на респираторное заболевание. С тем чтобы осуществить сбор неконтаминированного материала из нижних дыхательных путей для бактериального посева в дополнение к цитологическому исследованию секрета, был внедрен транстрахеальный метод. Позднее рутинным стало получение образцов с использованием волоконно-оптического эндоскопа при помощи катетера с проводником или без.

ПОКАЗАНИЯ

Точная диагностика первичного нарушения является предпосылкой к успешному лечению заболеваний дыхательной системы у лошадей. Методы, применяемые для выполнения такой диагностики, могут различаться в зависимости от случая, но тщательное физикальное обследование и внимательная аускультация могут достаточно охарактеризовать диагноз или служить показанием для дальнейших исследований, и поэтому должны проводиться всегда. Некоторые ключевые данные анамнеза и клинического исследования являются строгими показаниями для получения образцов из нижних дыхательных путей. Они включают кашель (особенно при физической нагрузке), выделения из носа, устойчивое тахипноэ, одышку, лихорадку, плохую работоспособность и непереносимость физических нагрузок. Обнаружение при эндоскопии повышенного количества слизи и/или слизисто-гнойного экссудата является дополнительным показанием к установлению природы этих выделений.
Аспирация трахеи или бронхоальвеолярный лаваж?

На выбор диагностической техники для обследования дыхательной системы влияет ряд факторов, включая анамнез и присутствующие симптомы, вероятные дифференциальные диагнозы, легкость выполнения процедуры и направление использования лошади (например, верховая - спортивная или верховая лошадь для отдыха). Однако эти техники не являются взаимозаменяющими, и если не принимать это во внимание, то вероятна неправильная интерпретация результатов. Аспирация трахеи (AT) и бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) служат для получения образцов из различных участков легких. При AT получают образцы выделений, которые скапливаются в трахее из любого участка легких; а при БАЛ получают образцы из периферического участка легкого. Учитывая последнее, можно предположить, что возможно различить диффузное заболевание легкого от поражения отдельной зоны, и взять образцы для исследования. Более того, нет выраженной корреляции между цитологией AT и БАЛ. Поэтому с точки зрения воспаления дыхательная система может быть «разделена на отсеки». Следовательно, увеличенное число воспалительных клеток может присутствовать в AT, но отсутствовать в БАЛ, и наоборот. «Здоровый» образец, полученный при помощи двух этих техник, не обязательно является показателем отсутствия заболевания во всем легком.
В некоторых случаях, когда конкретный диагноз имеет большую степень достоверности на основании анамнеза и клинических признаков, может быть показана та или другая из этих техник. Например, БАЛ в случаях подозрения на эмфизему или индуцируемое нагрузкой легочное кровотечение (EIPH), или AT в случае подозрения на бактериальную пневмонию или плевропневмонию. В других ситуациях, когда диагноз неопределенный, например у лошадей с плохой работоспособностью или кашлем при физической нагрузке, показано получение образцов одновременно двумя способами, чтобы оценить общее состояние дыхательных путей.
ТЕХНИКА

Разработано несколько методик получения AT, каждая из которых имеет преимущества и недостатки. При выборе техники наиболее важно принимать во внимание показания к микробиологическому посеву трахеобронхиальных выделений. В целом аспираты, полученные эндоскопически, не подходят для этого, так как они неизбежно контаминируются флорой верхних дыхательных путей. Однако для получения образцов, пригодных для микробиологического культивирования, можно использовать катетер с проводником, введенный через эндоскоп. В качестве альтернативы можно применить технику транстрахеальной (чрезкожной) аспирации.
Выбор техники может значительно повлиять на численность и типы полученных клеток. Поэтому рекомендуется стандартизировать процедуры в отношении техники, времени получения образца, объема и вида инсталлируемой жидкости, хранения образцов и их подготовки для достоверной интерпретации и сравнения результатов.
Транстрахеальные аспираты

Обоснование выполнения транстрахеальной аспирации (TTA) основано на том факте, что у здоровых лошадей бактериальная популяция, происходящая из верхних дыхательных путей, присутствует ниже проксимального отдела трахеи в незначительном количестве. Поэтому микроорганизмы, культивированные из AT, представляют собой те бактерии, которые находятся в дистальных отделах трахеи и нижних дыхательных путях. Эти бактерии могут присутствовать транзиторно или могут быть участниками патологического процесса. Очень важно различать эти два явления.
Образцы, полученные путем транстрахеальной аспирации, пригодны для цитологической оценки и окрашивания по Грамму, а также бактериального или грибкового посева. Однако эта техника инвазивна, и потенциальные осложнения ограничивают ее широкое применение. Наиболее частые осложнения включают подкожное абсцедирование в месте пункции, разрыв трахеи и кровотечение, а также хондрит и пневмомедиастинум. Кроме того, катетер может отломиться в просвете трахеи, но в большинстве случаев он быстро откашливается и проглатывается. Правильная техника предотвращает большинство неприятных осложнений.
Могут использоваться различные комбинации игла-катетер, но критически важной остается асептика. Компоненты могут быть приобретены как по отдельности, так и в комплекте и включать катетер-поверх-иглы в качестве проводника, катетер для промывания и мандрен. Удобная комбинация катетеров состоит из иглы 12G, канюли поверх иглы длиной 7,5 см и мочевого катетера для собак № 5Fr с косо срезанным кончиком.
Для выполнения трахеальной аспирации обычно показана седация, в этих целях, как правило, используется ксилазин (Rompun). Участок размером приблизительно 6 х 6 см над средней третью шейной части трахеи следует выбрить и подготовить к асептической операции. Подкожно над срединной линией в виде подушки инъецируется раствор местного анестетика (приблизительно 1 мл), после чего выполняется проникающий разрез кожи и подкожной ткани лезвием для скальпеля № 15. Трахею фиксируют одной рукой и вводят канюлю в просвет трахеи между двумя хрящевыми кольцами. Мандрен извлекают, и в просвет трахеи вводят мочевой катетер до уровня входа в грудную клетку, где производятся промывание и аспирация. В большинстве случаев достаточно 10-15 мл стерильного изотонического солевого раствора для получения удовлетворительных образцов. Однако могут потребоваться повторные вливания. После того как необходимый образец получен, катетер следует извлечь, удерживая канюлю на месте во время извлечения, чтобы минимизировать контаминацию околотрахеальных тканей.
Аспирация трахеи: эндоскопическая техника с использованием беспроводниковых катетеров

Альтернативой, которая хорошо переносится лошадьми и пользуется возрастающей популярностью, является получение AT через волоконно-оптический эндоскоп. Однако образцы, полученные с использованием беспроводниковых катетеров, контаминированы бактериями из носоглотки и непригодны для культивации микроорганизмов. Эндоскопия позволяет визуализировать респираторный тракт во время получения образцов, где оценка слизистой оболочки трахеи (степень гиперемии) и содержимого ее просвета (качество и количество слизи, слизисто-гнойный секрет и кровь) могут помочь в интерпретации результатов цитологии. Более того, если позволяет длина эндоскопа, можно исследовать большие бронхи, где иногда обнаруживается гнойный дебрис, отделяющийся из конкретного бронха и свидетельствующий о легочном абсцессе.
Маленький полиэтиленовый катетер проводится через биопсийный канал эндоскопа, и инстиллируется 10-15 мл стерильного изотонического солевого раствора. Большинство лошадей имеют выгнутый вентрально участок трахеи, впереди от бифуркации трахеи и на одном уровне с входом в грудную полость. Жидкость скапливается в этом месте и образует «лужу», из которой она может быть аспирирована. Главным предназначением образцов, полученных при помощи данной техники, является цитологическое исследование.
Аспирация трахеи: эндоскопическая техника с использованием катетеров с проводником

Недавно были опробированы проводниковые системы для получения неконтаминированных образцов из нижних дыхательных путей посредством эндоскопии. У взрослых лошадей преимуществами получения проб при помощи проводниковых катетеров являются неинвазивность, скорость получения образцов, визуальная ревизия дыхательных путей и управляемость катетера. Достоинств в этом методе значительно больше, чем при транстрахеальном, включая уменьшение вероятности бактериальной или клеточной контаминации из верхних дыхательных путей.
Исследовано несколько мультипросветных, телескопических катетеров с пробкой (заглушкой). Один из них - эндоскопический микробиологический аспирационный катетер (Катетер ЕМАС800, Mila International, Phoenix, Ariz.). Этот катетер имеет гликолевую пробку в наружном катетере, чтобы поддерживать стерильность во время продвижения его через эндоскоп и трахею, и внутренний катетер для взятия стерильного образца. Другая система представляет собой 8Fr-направляющий катетер с 5Fr-катетером внутри (Катетер V-EBAL-8.0-190, Cook Veterinary Products, Bloomington, Ind.). Перед каждым получением образца эндоскоп и его биопсийный канал необходимо дезинфицировать. Подходящим дезинфектантом является глутаровый альдегид (Cidex).
Остается спорным вопрос о пригодности образцов, полученных проводниковыми катетерами, для микробиологической культивации. На качество полученных проб определенно влияет техническое мастерство. Факторами, помогающими предотвратить контаминацию, являются быстрое получение образца, ограниченный объем инфузата (10-15 мл) и введение только внутреннего катетера в трахеальное скопление жидкости, а не катетера целиком. Кроме того, если лошадь часто кашляет во время процедуры, риск контаминации повышается, и эти образцы редко пригодны для бактериологического посева.
ТЕХНИКА: ДРУГИЕ АСПЕКТЫ

Транспортировка лошадей перед аспирацией трахеи

В течение 6-12 часов ограничения подвижности головы (например, привязывание при транспортировке) численность бактерий и воспалительных клеток в нижних дыхательных путях может значительно возрастать. Несмотря на то что обычно через 12 часов после прекращения ограничения движений у лошадей происходит очищение, последнее может задерживаться, если лошади дегидратированы.
До или после физической нагрузки

Если брать пробы после 30-60 минут умеренной или интенсивной физической нагрузки, можно получить образцы большей диагностической ценности. Эти образцы содержат дополнительные выделения, которые более достоверно представляют различные регионы дыхательной системы и с большей вероятностью выявляют присутствие заболевания дыхательных путей. Однако воздействие физической нагрузки на цитологические изменения AT требует дальнейшего изучения, так как нагрузка может вызывать воспаление в нижних дыхательных путях у людей, а у лошадей наблюдалась слабая нейтрофилия в БАЛ после физической нагрузки. Кроме того, нагрузка может увеличить степень ротоглоточной контаминации нижних дыхательных путей и, таким образом, повлиять на результаты бактериального посева. У здоровых лошадей такая контаминация из верхних дыхательных путей быстро устраняется благодаря механизму слизисто-реснитчатого очищения, и образцы, полученные приблизительно через 30 минут после нагрузки, редко содержат такие загрязнения.
Хранение образцов

В практике гиппиатрии AT часто получают в полевых условиях, из-за чего возникает вынужденная задержка во время транспортировки образцов. В образцах, хранящихся в течение 24 часов при 4 "С в закрытом колпачком шприце, не происходит значительных изменений в относительной численности клеток. В пробах от здоровых лошадей не возникает избыточного бактериального роста, а у лошадей с пневмонией численность аэробных бактерий в течение 24 часов не изменяется. Однако анаэробные бактерии не переносят хранения, и в случае подозрения на эти бактерии, задержки в обработке быть не должно.
Если предполагается задержка более 24 часов, или доступ к холоду невозможен, часть AT следует растворить в равном объеме фиксирующего раствора. В таких случаях следует связаться с лабораторией, где будут обрабатываться образцы, потому что метод фиксации зависит от используемой техники окрашивания. Остаток образца следует оставить неразведенным для подсчета клеток и микробиологического исследования.
Приготовление препаратов и окрашивание

Если AT предполагается обрабатывать в лаборатории клиники, его прежде всего следует грубо оценить на предмет количества слизи, слизисто-гнойного секрета или присутствия крови. Если AT чистый или содержит всего несколько слизистых нитей, требуется центрифугирование пробы перед изготовлением мазков. Это можно сделать с помощью цитоцентрифуги (в которой клетки и другие элементы осаждаются в процессе центрифугирования непосредственно на стекла), либо можно обработать образцы на обычной центрифуге, декатировать супернатант и изготовить мазки из осадка.
Если проба мутная, содержит много слизистых нитей или имеет темно-красный цвет, можно сразу изготовить мазок из свежеполученного или из разведенного и фиксированного образца. В качестве альтернативы можно развести мутный AT стерильным изотоническим солевым раствором, и разведенный образец центрифугировать. Добавление солевого раствора к густым, вязким пробам помогает разбавить клеточные и слизистые элементы и облегчить идентификацию этих компонентов. Мазки можно окрасить, используя разнообразные цитологические красители. В общем применение простой краски, такой как модифицированная Райта-Гимзе, достаточно для рутинного анализа AT.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ

С интерпретацией AT связан ряд противоречивых моментов. Определение нормальных и ненормальных цитологических признаков и значения увеличения численности воспалительных клеток и слизи, а также интерпретация бактериологических результатов остаются весьма проблематичными.
Слизь

Интерпретацию объема слизи в AT лучше всего проводить совместно с эндоскопией нижних дыхательных путей. У здоровой лошади эффективен механизм слизистореснитчатого очищения, так что элиминация слизи находится в равновесии с ее продукцией. Следовательно, нижние дыхательные пути содержат мало или не содержат вообще слизисто-клеточного материала и малое количество клеток. Трахеальные аспираты от здоровых лошадей полупрозрачные, серого цвета с несколькими тонкими нитями чистой слизи, а цитологические препараты содержат скудное количество слизи.
Когда обнаруживается увеличенное количество слизи, необходимо цитологическое исследование, так как различить слизь и слизисто-гнойные выделения может быть трудно при грубой оценке. Например, лошадь с хроническим кашлем в анамнезе может иметь AT, который выглядит слизистым и серо-белым, создавая впечатление септического бронхита. Однако цитология часто выявляет большое количество активных макрофагов с обильной слизью и незначительным числом бактерий. Таким образом, в подобных случаях без цитологической оценки может быть начато неправильное лечение.
Характерные причины повышенного количества слизи включают бактериальную, вирусную или паразитарную пневмонию, хронический бронхит, эмфизему и воспалительное заболевание дыхательных путей (IAD). В таких случаях AT содержит различные количества густой, более вязкой слизи, которая может иметь цвет от серого до кремового. В цитологических препаратах слизь может быть густой и уплотненной (темное базофильное окрашивание) или может иметь форму слепка дыхательных путей. Внутри нитей густой слизи могут наблюдаться «впечатанные» дегенерирующие лейкоциты. Могут быть обнаружены темные кольца сгущенной слизи, окруженные полупрозрачной периферической зоной (спирали Куршмана). Однако в некоторых случаях значение повышенного количества слизи в дыхательных путях остается неясным, особенно когда нейтрофилы отсутствуют или малочисленны, активировано много макрофагов, и нет очевидных признаков наличия заболевания дыхательных органов.
Общая численность ядерных клеток

Общая численность ядерных клеток (ОЧЯК) показывает общую клеточность образца и помогает в интерпретации относительной численности отдельных видов воспалительных клеток. Однако на точность ОЧЯК влияет ряд факторов, среди которых фактор вариабельного разведения солевым раствором, большое количество слизи, которая может скрывать в себе клетки и влияние техники. Тем не менее ОЧЯК и численность эритроцитов должны определяться настолько точно, насколько это возможно с помощью счетной камеры гемоцитометра Ньюбауэра. Трахеальные аспираты от клинически здоровых лошадей обычно содержат менее чем 10в6 клеток/мл, с малым количеством эритроцитов или их отсутствием. Образцы от лошадей с воспалением дыхательных путей имеют слабое или умеренное повышение ОЧЯК и могут выглядеть белыми, серыми, желтыми или коричневыми. Наибольшее повышение ОЧЯК возникает в случаях бактериальной пневмонии или плевропневмонии, эмфиземы или инвазии легочными гельминтами.
Цитология

Прежде всего, следует оценить показательность цитологических препаратов, при этом в удовлетворительных AT содержатся клетки со всех уровней легочного древа, включая цилиндрические и кубические эпителиальные клетки и альвеолярные макрофаги. Если клетки со всех уровней легочного древа не представлены, то возможна ограниченная интерпретация, если же образцы бедно насыщены клетками или если преобладают эпителиальные клетки при отсутствии макрофагов, то образцы должны рассматриваться как неадекватные.
Эпителиальные клетки

В AT от здоровых лошадей обнаруживается небольшое количество эпителиальных клеток, хотя их численность может быть увеличена при использовании эндоскопических методов получения проб. Эпителиальные клетки -это преимущественно клетки реснитчатого эпителия, и они могут различаться по размеру и форме. Их размер отражает место происхождения, при этом цилиндрические клетки происходят из дыхательных путей большего размера, а кубические клетки - из дыхательных путей меньшего размера. Клетки сквамозного эпителия не должны присутствовать в AT от здоровых лошадей. Однако они часто обнаруживаются и говорят о орофарингеальной контаминации. Идентификация присутствия этих клеток является предпосылкой для точной интерпретации результатов микробиологического посева.
У здоровых лошадей могут наблюдаться слабые изменения в эпителиальных клетках, что, возможно, отражает естественное изнашивание клеток. Патологические изменения в эпителиальных клетках (эпителиальная атипия) являются результатом воспаления. В случаях инфекционного заболевания дыхательной системы эпителий может повреждаться напрямую. Хотя обнаружение эпителиальной атипии может помочь в диагностике воспаления дыхательных путей, присутствие этих изменений не является патогномоничным для конкретного этиологического фактора. Кроме того, остается необоснованным утверждение о том, что увеличенная численность безресничных клеток или цилиарных пучков наблюдается у лошадей с низкой работоспособностью и является диагностически значимым показателем для данного состояния.
Макрофаги

Альвеолярные макрофаги легких (AMЛ) - самый многочисленный тип воспалительных клеток в AT от здоровых лошадей. Их присутствие совместно с клетками реснитчатого эпителия является предпосылкой для интерпретации цитологии AT, так как они показывают, что в образце представлены все уровни клеток легочного древа. Хотя повышенная численность AMJI обычна для здоровых лошадей, она является редкостью для лошадей с увеличенной ОЧЯК.
Активность макрофагов в AT может значительно варьировать. Цитоплазматические включения макрофагов отражают объем и вид эндогенных и экзогенных веществ, присутствующих в нижних дыхательных путях. Макрофаги с выраженной вакуолизацией цитоплазмы не считаются аномальными, но заметное усиление вакуолизации цитоплазмы или крупные вакуоли, которые деформируют клетку и смещают ядро, обычно присутствуют только при наличии легочного заболевания. Однако следует проявлять осторожность в интерпретации поглощенных макрофагами элементов. Например, внутри клетки можно обнаружить грибковые споры или гифы, но это не означает, что лошадь страдает грибковой пневмонией. В таких случаях для подтверждения диагноза должны быть очевидны другие цитологические признаки заболевания.
Небольшое число многоядерных макрофагов (гигантские клетки) обычно в AT от лошадей без признаков воспаления. Их численность может повышаться при увеличении количества внеклеточного дебриса или при хроническом воспалении, но эта находка является противоречивой.
После кровотечения в респираторном тракте эритроциты, находящиеся внутри дыхательных путей, быстро фагоцитируются легочными макрофагами (эритрофаги). Затем красные клетки разрушаются, в результате чего образуются гемосидерофаги. Оливково-зеленый пигмент свидетельствует о недавнем кровотечении, в то время как старый пигмент становится более золотистым. Количество присутствующего пигмента варьирует, при этом некоторые клетки содержат несколько гранул, а другие содержат массивные отложения. Индуцированное нагрузкой легочное кровотечение (EIPH) является наиболее частой причиной присутствия гемосидерофагов, и эти клетки наблюдаются в AT у большой части тренирующихся лошадей. «Приемлемое» количество гемосидерофагов противоречиво, так как численность этих клеток в AT может не отражать общего объема крови внутри дыхательных путей. Большое количество крови, вероятно, выводится путем слизисто-реснитчатого очищения и проглатывается. Кроме того, гемосидерофаги выводятся медленно и могут присутствовать в течение месяцев после возникновения кровотечения. Поэтому численность гемосидерофагов и количество гемосидерина в отдельных клетках следует интерпретировать с осторожностью.
В случаях, когда подозревается EIPH, также необходимо определиться с выбором, будет выполняться AT или БАЛ. Хотя образцы, полученные при AT, содержат секреты из всех отделов легких, некоторые исследования показали, что БАЛ может быть более чувствительным для определения EIPH, так как с помощью БАЛ можно взять образцы конкретно из воздухоносных путей, располагающихся каудо-дорсально.
Лимфоциты

Лимфоциты в малом количестве присутствуют в нормальных AT и выглядят, как маленькие сферические клетки со скудной цитоплазмой и относительно крупным конденсированным ядром. Их бывает трудно четко отличить от некоторых маленьких макрофагов, оголенных ядер эпителиальных клеток и эпителиальных клеток, ориентированных торцевой стороной к взору исследующего, и эту группу иногда обозначают, как малые мононуклеарные клетки. Численность лимфоцитов может возрастать в случае заболевания органов дыхания, но это противоречиво, и не установлено корреляции между колебаниями популяции этих клеток и конкретными патологическими процессами.
Нейтрофилы

Считается, что популяция хорошо сохранившихся нейтрофилов присутствует в дыхательных путях у лошадей, но относительный процент этих клеток в норме должен быть низким. Однако необходимо учитывать, что нейтрофилы реагируют на многие раздражители, и их численность может быстро колебаться. Кроме того, нейтрофилы обнаруживаются в больших пропорциях в AT, чем в БАЛ здоровых лошадей, и это, вероятно, отражает большее взаимодействие с вредными воздействиями в более крупных проксимальных отделах дыхательных путей. Более того, в трахею поступают секреты из многих участков легкого, и поэтому увеличение числа нейтрофилов может указывать на повышенную вероятность получения нейтрофилов из какого-либо места в легком.
Дилемма, связанная с интерпретацией процентного содержания нейтрофилов, заключается в определении того, какая величина (и есть ли она) отражает конкретное изменение. Внутри самих исследований и между ними имеются большие различия в величине пропорции нейтрофилов у здоровых лошадей. Кроме того, наблюдается слабая корреляция между относительным числом клеток (включая нейтрофилы) в AT и наличием патологии в легких. Эти наблюдения заставили поставить под вопрос пользу, которую приносят AT в определении хронических заболеваний дыхательных путей. Однако исследования, проведенные у молодых и более однородных популяций лошадей, выявили стабильно низкие величины процентного содержания нейтрофилов у здоровых особей. Более того, недавние исследования, проведенные среди скаковых лошадей, выявили низкое процентное содержание нейтрофилов в AT от большинства здоровых лошадей и обнаружили устойчивую связь между увеличением доли нейтрофилов и симптомами респираторного заболевания (кашель) и повышенную вероятность выделения существенного количества бактерий. Другие исследования показали, что если другие признаки воспаления нижних дыхательных путей (повышенное количество слизи, увеличение числа клеток) принимать в расчет с использованием балльной оценки воспаления, то лошади с низкими баллами имеют низкую относительную численность нейтрофилов. По этим причинам у молодых верховых спортивных лошадей содержание нейтрофилов в AT менее 20-30% считается в пределах нормы.
Абсолютное количество присутствующих клеток (ОЧЯК) также необходимо принимать во внимание при интерпретации значения пропорций всех воспалительных клеток, и в особенности нейтрофилов. К примеру, хотя нейтрофилы могут составлять относительно большую долю клеток в образце, реальное их количество может быть незначительным, если ОЧЯК низкая. Наличие токсических или дегенеративных изменений в нейтрофилах может помочь в интерпретации в случаях, когда ОЧЯК низкая. В большинстве случаев, в которых ОЧЯК повышена, нейтрофилы являются самым распространенным типом воспалительных клеток. Например, они являются преобладающим типом клеток, которые наблюдаются у лошадей с бактериальной пневмонией или плевропневмонией. В таких случаях доля нейтрофилов составляет более 40% и часто превышает 90%. Повышенная общая и относительная численность нейтрофилов также может быть отмечена в случаях IAD (воспалительное заболевание дыхательных путей), EIPH, хронического бронхита и эмфиземы, но процентное их содержание варьирует. Лошади с интерстициальной пневмонией обычно имеют низкое количество нейтрофилов в AT. В некоторых случаях интерпретация увеличенной численности нейтрофилов может быть трудной, но ей может содействовать распознавание цитологической картины респираторного заболевания или использование комплексной балльной оценки воспаления.
Наличие токсических или дегенеративных изменений может помочь в интерпретации увеличенного процентного содержания нейтрофилов. При некоторых заболеваниях (например, эмфизема, EIPH, некоторые случаи IAD) нейтрофилы в большинстве своем зрелые, без дегенеративных и токсических изменений.
Эозинофилы

Исследования клинически здоровых взрослых лошадей показывают, что эозинофилы обычно присутствуют в трахеобронхиальных секретах в очень малых количествах (0-2%). Эозинофилы могут быть распределены в мазках неравномерно, и полуколичественное определение может быть предпочтительным методом выражения относительного их содержания. Увеличенная численность эозинофилов в AT наиболее стабильно обнаруживается при инфестации легочными гельминтами (Dictyo-caulus amfieldi) и миграции аскарид (Parascaris equorum). В таких случаях относительное содержание эозинофилов может достигать более 85% клеток AT. Меньшее повышение числа эозинофилов в AT возникает при отсутствии паразитарных инвазий и часто интерпретируется как признак гиперчувствительности I типа в ответ на ингаляцию антигенов. Однако повышенное количество эозинофилов в AT у лошадей с эмфиземой является непостоянным признаком, хотя в основе этого заболевания, предположительно, лежит аллергический компонент.
Тучные клетки

Тучные клетки можно идентифицировать благодаря их специфически окрашенным гранулам, которые легче всего обнаружить в препаратах, окрашенных метахроматическими красителями (толуидиновый голубой или краситель Лейшмана) и слабо окрашенных традиционными реагентами (т. е. Diff-Quik), У здоровых лошадей тучные клетки в AT редки или присутствуют в малых количествах. В образцах, полученных методом БАЛ, может отмечаться большее количество тучных клеток. Это различие можно объяснить преобладающим распределением тучных клеток у лошадей в более мелких дыхательных путях и альвеолах. Существует мало информации относительно ненормального процентного содержания тучных клеток в AT лошадей или значения изменений в численности этих клеток. Исследования относительно повышенного содержания тучных клеток в БАЛ дают основания предполагать, что эти клетки могут быть связаны с гиперреактивностью дыхательных путей и респираторными затруднениями во время физической нагрузки.
Микроорганизмы, дебрис и артефакты

В AT от здоровых лошадей могут наблюдаться разнообразные микроорганизмы и атмосферный дебрис, что является отражением окружающей среды и мукоцилиарной (слизисто-реснитчатой) функции на момент получения образца. Грибковые споры и иногда гифы - это элементы, которые обнаруживаются чаще всего и могут быть вне- и внутриклеточными (поглощенными макрофагами). Их присутствие говорит скорее не о грибковой инфекции, а о местонахождении лошади. Пыльца и частицы растений также являются обычными, а иногда можно наблюдать и другие посторонние частицы, включая волосы, сенных клещей и пигментированный дебрис. Трава, земля и материал искусственного покрытия ипподрома часто присутствуют в образцах, полученных после тренировки. Бактерии редко обнаруживаются в AT от здоровых лошадей, но их численность зависит от орофарингеальной контаминации (клетки сквамозного эпителия) и физической нагрузки или транспортировки, предшествовавших получению AT, Внутриклеточные бактерии, скорее всего, указывают на существенную популяцию бактерий в нижних дыхательных путях.
Культивирование микробов

Результаты культивирования микробов требуют особого внимания, так как часто их толкование является ошибочным. Выделение бактерий из AT может свидетельствовать об инфекции, транзиторной популяции в нижних дыхательных путях или контаминации AT во время его получения. Соответствующая тактика ведения случаев респираторного заболевания при каждом из этих сценариев должна различаться. Если подозревается бактериальное заболевание дыхательных путей, AT для подтверждения диагноза следует получать посредством проводникового катетера или транстрахеальной аспирации (ТТА).
Аспираты, полученные от лошадей с бактериальными инфекциями нижних дыхательных путей, содержат повышенное количество слизи, имеют увеличенную общую численность клеток и увеличенную относительную и абсолютную численность нейтрофилов, среди которых могут быть клетки с дегенеративными изменениями и внутриклеточными бактериями. Без этих цитологических признаков воспаления показания к культивированию образца отсутствуют. Кроме того, пробы с большим количеством клеток сквамозного эпителия не должны культивироваться, даже если присутствует много нейтрофилов, так как это свидетельствует о контаминации. Если такие образцы культивированы и выделены многочисленные бактерии, не представляется возможным придавать какое-либо значение этим изолятам. В таких случаях рекомендуется повторное получение образцов.
Образцы с признаками воспаления дыхательных путей следует подвергнуть аэробной и анаэробной культивации. Численность культур, которые определяют количество колониеобразующих единиц (КОЕ) каждого вида, предоставляет дополнительную информацию. При посеве аспиратов, полученных соответствующим образом от здоровых лошадей или от лошадей с воспалением дыхательных путей небактериальной этиологии, обычно культивируются менее чем 10в3 бактерий-КОЕ/мл, а часто бактерии отсутствуют вообще. Если получено более чем 10в3 КОЕ/мл, то вероятно, что эти бактерии задействованы в патологическом процессе, и идентификация видов бактерий, имеющих высокую численность, поможет в интерпретации их значимости.
Идентификация изолированных бактерий позволяет отличить вероятных патогенов от контаминатов. При неосложненных инфекциях нижних дыхательных путей у лошадей обычно изолируются следующие бактерии: Streptococcus spp. (б- и в-гемолизирующие), Pasteurella spp., Actinobacillus spp. и иногда Bordetella bronchiseptiea и Mycoplasma spp. Представители семейства кишечных бактерий (Enterobacteriaceae) (например, E. coli, Klebsiella spp.) чаще выделяются после индукции антимикробной терапии. В случаях плевропневмонии или абсцесса легкого могут быть выделены анаэробные бактерии (например, Bacteroides spp.). Пневмонию у жеребят в дополнение к Rhodococcus equi могут вызывать все изоляты, служащие причиной заболевания у взрослых животных. К патогенным бактериям, которые редко вызывают болезни нижних дыхательных путей, но часто контаминируют пробы, относятся Staphylococcus spp. (коагулазо-позитивные и коагулазо-негативные), Pseudomonas spp. и Proteus spp. Следует проявлять осторожность в интерпретации этих излоятов. Выделение непатогенных бактерий указывает на контаминацию во время получения пробы.
СУБКЛИНИЧЕСКОЕ ЗАБОЛЕВАНИЕ

Субклиническое заболевание дыхательных путей определяется как повышение количества слизи и увеличение численности воспалительных клеток в нижних дыхательных путях у лошадей при отсутствии выраженных признаков респираторной дисфункции. Однако верхние границы нормы в отношении слизи и различных воспалительных клеток в AT в настоящее время неоднозначны, что делает определение субклинического заболевания затруднительным. Очевидно, необходимо усовершенствовать описание нормальных и патологических отклонений в AT для того, чтобы стало возможным распознавать скрытые изменения и оценивать их влияния. Для такого описания может потребоваться учитывать ряд факторов, таких как способ содержания, вид подстилки, кормление, возраст и использование лошади. Кроме того, интерпретация значимости субклинического заболевания может различаться в зависимости от требуемого уровня работоспособности, так как слабое воспаление может иметь более существенное влияние на лошадей, от которых требуют оптимальной функции легких для достижения максимальных спортивных результатов.


Добавить комментарий
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: